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糖化血紅蛋白檢測(cè)方法和儀器
2011-03-24
糖化血紅蛋白(HbA1c)檢測(cè)的方法很多，測(cè)定方法主要有四類(lèi)：色譜法、電泳法、免疫法和化學(xué)法。色譜法主要有離子交換層析法、高壓液相色譜法(HPLC)和親和層析法等。 目前最常用的HbA1c測(cè)定方法是離子交換層析法和電泳法。前者精密度高、重復(fù)性好且操作簡(jiǎn)單，已被臨床廣泛采用。國(guó)內(nèi)主要采用Bio-Rex70陽(yáng)離子樹(shù)脂微柱層析法，其微柱可重復(fù)使用多次。正常參考值：HbA1c：X±2s=6.5±1.5%;>8.0%為HbA1c增高。 離子交換層析法 分手工和自動(dòng)兩種。手工微柱有Bio-Rad和西班牙BIOSYSYEMS等多家公司產(chǎn)品，手工微柱操作會(huì)受到人工因素影響，可能會(huì)洗脫不完全或過(guò)度洗脫，并受外界環(huán)境溫度的影響，而某些血紅蛋白如HbF異常增加時(shí)，也會(huì)與糖化血紅蛋白同時(shí)洗脫，從而使結(jié)果產(chǎn)生偏差。
相應(yīng)的儀器以英國(guó)DREW SCIENTIFIC公司DS5糖化血紅蛋白儀為例(BIO-RAD公司DIASTA亦為同一產(chǎn)品)，采用微柱法離子交換層析和梯度洗脫技術(shù)可全自動(dòng)分離血紅蛋白的變異體與亞型，除可測(cè)定糖化血紅蛋白外，還可同時(shí)檢測(cè)出HbS與HbC的存在與否，在計(jì)算糖化血紅蛋白值時(shí)會(huì)自動(dòng)扣除變異體產(chǎn)生的影響，從而使結(jié)果更為準(zhǔn)確，可靠，CV值小于2%。同時(shí)該儀器配有專(zhuān)門(mén)的稀釋溶血器，可直接進(jìn)行全血操作，5分鐘即可報(bào)告結(jié)果，并自動(dòng)儲(chǔ)存樣品檢測(cè)結(jié)果，層析柱價(jià)格也較為低廉，適合于較多標(biāo)本的醫(yī)院檢測(cè)。更大型的儀器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold，除可全自動(dòng)測(cè)定糖化血紅蛋白外，還可分離檢測(cè)血紅蛋白的600多種變異體和亞型，用于地中海貧血等疾病的診斷。
親和層析 是目前糖化血紅蛋白檢測(cè)的新方法，該方法特異性強(qiáng)。英國(guó)DREW SCIENTIFIC公司的DSI糖化血紅蛋白分析儀日前剛剛獲得美國(guó)食品藥品管理署(FDA)的認(rèn)可獲準(zhǔn)上市，作為目前世界唯一的快速床邊糖化血紅蛋白儀，它采用硼酸親和層析法，只需10ul全血即可在4分鐘內(nèi)快速分離檢測(cè)糖化血紅蛋白，為臨床提供即時(shí)的化驗(yàn)結(jié)果，尤其對(duì)于小兒患者而言更有優(yōu)勢(shì)。其檢測(cè)結(jié)果也完全達(dá)到并超過(guò)臨床要求，CV值在5%以?xún)?nèi)。 高壓液相 儀器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等，可全自動(dòng)分離測(cè)定糖化血紅蛋白及血紅蛋白的變異體和亞型，但儀器的操作保養(yǎng)要求較高。
免疫凝集法 原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)的單抗結(jié)合進(jìn)而發(fā)生凝集反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)表示凝集量，可用于全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行測(cè)定。儀器也有Bayer的DCA-2000，要求對(duì)樣品成批試驗(yàn)，每次試驗(yàn)均應(yīng)使用一個(gè)新試劑盒，操作前應(yīng)注意混勻試劑。免疫凝集法測(cè)定，精密度較差，CV值一般大于6%。
離子捕獲法 亦是新近發(fā)展起來(lái)的新方法，代表儀器有Abbott的IMX，其原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)抗體結(jié)合后，聯(lián)以熒光標(biāo)記物，形成一反應(yīng)復(fù)合物，再聯(lián)結(jié)帶負(fù)電荷的多聚陰離子復(fù)合物，而在IMX反應(yīng)孔中的玻璃纖維預(yù)先包被了高分子的四胺合物，使纖維表面帶正電，使前述的反應(yīng)復(fù)合物吸附在纖維表面，經(jīng)過(guò)一系列清洗后測(cè)定其熒光強(qiáng)度，從而得到糖化血紅蛋白的濃度，該方法適用于成批糖化血紅蛋白標(biāo)本的檢測(cè)。
電泳方法 如毛細(xì)管電泳也能分離檢測(cè)糖化血紅蛋白和血紅蛋白的變異體，但目前尚無(wú)商品化，具有批量樣本通過(guò)能力的儀器面世，相當(dāng)程度地限制了該方法的臨床應(yīng)用，但優(yōu)點(diǎn)是成本低廉、普及性強(qiáng)。
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